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問(wèn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)包括哪些實(shí)驗(yàn)

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問(wèn)題描述:

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)包括哪些實(shí)驗(yàn),麻煩給回復(fù)

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離心技術(shù):是分離純化蛋白質(zhì)、酶、核酸(DNA、RNA)、細(xì)胞的最常用方法之一。

電泳(electrophoresis):帶電粒子在電場(chǎng)中向著與其所帶電荷相反方向電極移動(dòng)的現(xiàn)象。可用于分離不同分子量的生物大分子。

1. 蛋白質(zhì)的電泳:用途:蛋白質(zhì)的定量。

2. 核酸的電泳:用途:用于核酸的分離、鑒定、純化、回收。比如:我只需要長(zhǎng)度300bp左右的分子。那么,電泳后,在切膠過(guò)程中,只切300bp處的分子即可。蛋白質(zhì)研究相關(guān)的技術(shù):

1. 含量測(cè)定:2. 結(jié)構(gòu)的測(cè)定:(1)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定:搞清楚蛋白質(zhì)肽鏈的氨基酸排列順序。方法:Edman降解法、質(zhì)譜法(MS, 將蛋白水解,多肽鏈分成小段。檢測(cè)肽段)(2)空間結(jié)構(gòu)測(cè)定:蛋白空間結(jié)構(gòu)分析比一級(jí)結(jié)構(gòu)分析復(fù)雜得多。方法:X射線衍射晶體分析法、核磁共振法等。

3. 功能的測(cè)定:(1)酵母雙雜交(YTH):假設(shè):欲檢測(cè)蛋白X與蛋白Y是否相互作用。檢測(cè)方法:將蛋白X與報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄因子的BD融合;將蛋白Y與AD融合;確認(rèn)蛋白X與蛋白Y形成的復(fù)合體能否激活報(bào)告基因的表達(dá)。如果能激活報(bào)告基因的表達(dá),說(shuō)明:X與Y形成了復(fù)合體,則BD和AD靠近,激活了下游報(bào)告基因的表達(dá);反之,報(bào)告基因不表達(dá)。原理:真核生物的轉(zhuǎn)錄因子(尤其是酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4),包括兩個(gè)彼此分離、但功能必需的結(jié)構(gòu)域:一個(gè)是與DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域-BD;一個(gè)是轉(zhuǎn)錄激活域-AD。BD識(shí)別轉(zhuǎn)錄因子效應(yīng)基因的上游序列并與之結(jié)合;AD通過(guò)與轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用,啟動(dòng)下游的基因轉(zhuǎn)錄。即使BD與AD分開(kāi),但如果在空間上較為接近時(shí)也能激活轉(zhuǎn)錄?!棉D(zhuǎn)錄因子的BD、AD這一特性,通過(guò)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子是否啟動(dòng)了其效應(yīng)基因的表達(dá),可研究蛋白質(zhì)X與Y是否相互作用。

(2) 蛋白質(zhì)芯片技術(shù):一種高通量、微型化、自動(dòng)化的蛋白質(zhì)分析技術(shù)。一次試驗(yàn)中可同時(shí)檢測(cè)幾百甚至幾千種目標(biāo)蛋白或多肽。

(3)免疫印跡技術(shù) Western blotting:利用抗原抗體特異反應(yīng)的原理。用途:檢測(cè)樣品中特定蛋白質(zhì)是否存在以及半定量分析、研究蛋白質(zhì)間的相互作用。

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)包括哪些實(shí)驗(yàn)

其他答案

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)包括生物信息學(xué)技術(shù)、蛋白質(zhì)表達(dá)技術(shù)、抗生素篩選基因工程技術(shù)、PCR分子克隆核酸電泳、扣除雜交藍(lán)白斑篩選等。

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