1.植物組織:植物組織一般要求重量大于 4g。
首先我們要準(zhǔn)備好液氮預(yù)冷的無酶管,并做好取樣器械的消毒和去RNA酶處理,盡量選取新鮮幼嫩、生長旺盛部位的樣本進(jìn)行迅速采集,然后用RNase-free水對樣品表面進(jìn)行快速的清洗,吸干表面液體之后放入無酶管中液氮速凍(時(shí)間不要太短哦),待徹底冷凍后,轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存。
2. 動物組織:送樣的重量一般要求在 2g以上。若在實(shí)驗(yàn)室中取樣,做好器械的消毒和去RNA酶處理的前期工作后,迅速進(jìn)行取樣。取下的樣品用RNase-free水迅速進(jìn)行沖洗,吸干表面水分,放入預(yù)先放置在液氮中預(yù)冷的無酶管中,速凍一段時(shí)間,轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存;對于野外采樣,無法攜帶液氮等情況時(shí),可以使用RNA保護(hù)劑。用RNase-free水對樣品表面進(jìn)行快速清洗,然后迅速切割成規(guī)定的大?。s黃豆粒),將樣品完全浸沒在RNA保護(hù)劑中,可以置于4℃中過夜(使保護(hù)劑滲透進(jìn)組織中),轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存。
3. 細(xì)胞樣品:轉(zhuǎn)錄組測序中,細(xì)胞一定要達(dá)到足夠的數(shù)量,以保證抽提的RNA的量。所以對于培養(yǎng)的細(xì)胞系,首先要確定細(xì)胞數(shù)量(建議5×10^6以上)。首先對收集好的細(xì)胞用1×PBS清洗幾遍,貼壁培養(yǎng)的先用少量胰酶消化一下(切記不要消化過度),離心,棄PBS,加入適量的Trizol裂解液并反復(fù)吹打混勻,直至形成清亮透明的液體,轉(zhuǎn)移至無酶管中,放-80℃冰箱保存。細(xì)胞量比較少的話,可以聯(lián)系我們的技術(shù)同事,來針對性給出合理化建議以便RNA抽提。
4. 血液樣品:血液樣本一般要求2ml以上。當(dāng)然我們要區(qū)分全血、血漿還是血清,不同的樣本因?yàn)樽陨硖匦圆煌枰獏^(qū)別對待。全血樣品記得一定要用抗凝采血管采集(不推薦肝素抗凝管,可用EDTA、檸檬酸鈉抗凝劑的抗凝管),采血后輕輕倒轉(zhuǎn)采血管混合4~5次,使抗凝劑與血液混勻。將采集好的全血快速轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的凍存管或離心管,按照每250ul/管分裝,加750ul(即三倍體積)的Trizol LS(家禽、魚類等紅細(xì)胞有核物種,按照 1:8 或 1:10 比例添加 Trizol LS/Trizol),混勻。液氮速凍后,放-80℃冰箱保存。每個(gè)環(huán)節(jié)盡可能的快速完成,避免RNA的降解。