主要考你基本的pcr實(shí)驗(yàn)操作,比如說(shuō)試劑的配置。

Pcr儀的基本操作程序設(shè)置。以及遇到問(wèn)題如何解決。

1. 試劑準(zhǔn)備階段試劑準(zhǔn)備是PCR操作的第一個(gè)流程，需要在試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)的超凈工作臺(tái)或生物安全柜進(jìn)行，用確保無(wú)污染的移液器、槍頭及容器等進(jìn)行分裝。所有的PCR體系都應(yīng)該在-20℃保存，除了ddH2O之外，其余的試劑組份需完全融化之后再加入，以免影響濃度。配制反應(yīng)體系應(yīng)在快速進(jìn)行，以減少非特異性擴(kuò)增。體系配制完成之后應(yīng)馬上進(jìn)行PCR反應(yīng)。

2. 樣本制備階段樣本制備是整個(gè)PCR反應(yīng)中最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，在接收樣本時(shí)一定要確保樣本的密封性以及樣本編號(hào)的唯一性。嚴(yán)格遵守操作規(guī)程進(jìn)行加樣操作，操作時(shí)候盡量少說(shuō)話(huà)或者不說(shuō)話(huà)。所有操作需要在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，操作前后生物安全柜需要進(jìn)行紫外燈消毒，注意生物安全柜中物品的排放。戴手套并勤于更換，要有「無(wú)核酸觀念」。

3. 核酸擴(kuò)增在核酸擴(kuò)增環(huán)節(jié)需要選擇質(zhì)量好的Ep管，裝入反應(yīng)體系的EP管上機(jī)前混勻、離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。在樣本檢測(cè)的同時(shí)設(shè)立對(duì)照（陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、陰性模板、試劑對(duì)照）。同時(shí)嚴(yán)密檢測(cè)PCR擴(kuò)增儀的各項(xiàng)性能指標(biāo)，其中對(duì)PCR擴(kuò)增儀而言溫度控制就意味著質(zhì)量。